几种常用的细菌计数方法

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几种常用的细菌计数方法

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 上面一节,冷柜价格已经告诉我们,细菌对冷柜中冷冻食品的影响是很重要的,如果超标,就会严重影响我们的健康,下面就来继续了解这方面的知识吧。一般从食品卫生的角度,对指标细菌的测定通常采用检测中温菌(Mesoj
philes)的方法,严格地说,是检测好气性中温细菌方法。所以采用这种方法,气要是考虑到与肠内细菌等的污染关系,这种检测与培养基种类和培养基温度有关。由于各国不同,或食品种类不同,对培养基的温度也有若干不同的规定,通常是将32~35℃,35~37℃作为培养温度,培养时间为24小时和28小时。

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1、计数器测定法

   
细菌计数有其实际价值,因为在生产过程中,对各个阶段的许多试样进行常规检验时,可从细菌计数来评价加工制造过程中的卫生情况。如果已知某一批产品的时间和温度,那么通过一定数目试样的检验数据就可以对该食品的卫生情况作出评价。

医院细菌室所需设备清单及功能简介“”澳门新葡新京网上导航 ,细菌的接种与培养方法操作规程:

即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数。本法简便易行,可立即得出结果。本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。

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一、细菌的接种根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状,采用不同的接种方法。l、平板画线分离法、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许,于平板l/5处密集涂布,然后回来作曲线连续划线接种,线与线间有一定距离,划满平板为止。、分区画线分离法此法适用于杂菌较多的标本。先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5),再在二、三区依次连续画线,每画线一区均将接种针灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线1~2次。以获得单个菌落。2、斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养。用灭菌接种环取菌少许,从培养基斜面底部向上划一直线,然后从底部向上作连续曲线画线。一直画到斜面顶端。3、液体接种法多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许,在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨,使细菌混合于液体中。4、穿刺接种法主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。用接种针取菌少许,从半固体培养基中央,平行于管壁垂直刺入,接近管底但不可接触管底,然后接种针原路退出。5、倾注平板法临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。将标本经适当稀释后,取一定量加入已灭菌的平皿内,倾入已经溶化并冷却至45℃左右的定量培养基,混匀,待凝固后倒置、培养。6、涂布接种法常用于纸片药物敏感性测定,也可用于被检标本的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面,然后用灭菌的L型玻璃棒反复涂布几次,使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。然后贴上药敏纸片培养,或直接培养观察结果。二、细菌培养方法根据临床初步诊断及待检细菌的种类,可选用不同的环境进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。1、需氧培养法本法是临床细菌室常用的培养方法,即将已经接种好的平板、斜面和液体培养基等。置于35℃温箱中孵育18~24小时。2、二氧化碳培养法本室用Co2孵箱将已接种好的培养基置于Co2孵箱内培养。3、厌氧培养(暂时未开展)三、分离及纯化法3.1、分离是指从原材料或多种细菌的混合培养物中将各种细菌彼此独立地分离开,以得到纯的单一菌株,技术步骤如下:作纯培养分离时,一般只用一只完整的琼脂平板。涂划多采用分区划线法,在一只平板中可划3~5个区。划法有两种:3.2、从临床标本分离细菌所含菌数相对较少时,可用接种环取标本涂布在平板一角边缘,然后从此区开始划线至1/3平板,为第一区,再在2、3区依次划线,每划完一个区域均将接种环灭菌一次,冷却后再划下一区域,每一区域的划线均接触上一区域的接种线1~2次,使菌量逐渐减少以获得单个菌落。3.3、快速划线分离法:采用快速划线使一接种环标本能分离出单个菌落,这与标本的菌量及操作者的技能有很大关系。3.4、纯化是指欲获得大量纯培养物的方法,所用平板大小可根据需要的菌量而定。方法是将一单个菌落或将相同的菌落作大量密集涂划于平板上而获得大量纯的培养物。

2、电子计数器计数法

   
在正常条件下,许多开放式的食品中的细菌往往是从各种设备或传送带的表面沾染的,即使对于设备进行经常的清洗,也总会有少量的病菌会通过容器、设备、传送带的表面,使产品受到污染,有时小的菌块甚至直接会落到产品中去。这种感染方式说明,细菌在生产线上不是均匀分布到产品上去的,因此在检查中,不能遁为一个试样出现阳性反应就否定全部产品。然而必须知道,食品上沾染的细菌确实可能致使产品全部变坏,如不及时采取杀灭措施,即使受到极小量的细菌污染,也.会导致严重的后果。从这个意义上说,细菌学的检查法是整个生产线上不可缺少的监测手段。通过检测,可以判明原料鲜度、生产线上的卫生状况、温控和操作人员卫生情况等,但这不能完全保证食品的安全性,由于不同品种和不同季节,其检查的菌种也不同。

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电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分是否为细菌。因此,要求菌悬液中不含任何碎片。

3、活细胞计数法

常用的有平板菌落计数法,是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高,是一种检测污染活菌数的方法,也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意:①一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,是最常用的活菌计数法。

4、比浊法

比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。

5、测定细胞重量法

此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。此法适于菌体浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。

6、测定细胞总氮量或总碳量

氮、碳是细胞的主要成分,含量较稳定,测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。

7、颜色改变单位法(CUU)

这种方法通常用于很小,用一般的比浊法无法计数的微生物,比如支原体等,因为支原体的液体培养物是完全透明的,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数,由于支原体固体培养很困难,用cfu法也不容易计数,因此需要用特殊的计数方法,即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计数微生物的相对含量的,下面以解脲脲原体为例,简单介绍其操作:

(1)取12只无菌试管,每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。

(2)在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0.2ml加入第二管,依次类推,10倍梯度稀释,一直到最末一管

(3)于37度培养,以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU,也就是支原体的最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变,他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.

一般来说,比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数,但是对支原体这样比较特殊的微生物,用CCU法比较合适。

测定微生物生长的方法很多,各种方法均有其优缺点,也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你,得根据你的具体条件而定。

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